В сферата на съвременните биологични и медицински изследвания анализът на in situ хибридизация (ISH) се появи като мощна техника за визуализиране и локализиране на специфични последователности на нуклеинова киселина в клетки или тъкани. Флуоресцентна in situ хибридизация (FISH), подтип на ISH, използва флуоресцентни сонди за свързване към комплементарни последователности на нуклеинови киселини, позволявайки на изследователите да откриват и изучават генетични аномалии, модели на генна експресия и др. Като доставчик на скенери за флуоресцентни слайдове, често ме питат дали нашите скенери могат да се използват ефективно за in - situ хибридизационен анализ. В този блог ще разгледам подробно този въпрос.
Разбиране на In - Situ хибридизационния анализ
In - situ хибридизационният анализ е многоетапен процес. Първо, тъканните проби се фиксират и пермеабилизират, за да позволят навлизането на сонди. След това към пробите се добавят специфични проби на нуклеинова киселина, които са белязани с радиоактивни изотопи, флуоресцентни багрила или други маркери. Тези проби се хибридизират с техните комплементарни последователности в целевите нуклеинови киселини. След хибридизация несвързаните проби се отмиват и пробите се визуализират.
FISH, по-специално, предлага няколко предимства. Той предоставя пространствена информация с висока разделителна способност за местоположението на последователностите на нуклеинова киселина в клетките и тъканите. Флуоресцентните сигнали могат лесно да бъдат открити и количествено определени и множество проби, маркирани с различни флуорофори, могат да се използват едновременно за откриване на множество целеви последователности.
Ролята на флуоресцентните слайд скенери в ISH анализа
Флуоресцентният слайд скенер е устройство, което улавя цифрови изображения с висока разделителна способност на флуоресцентно маркирани слайдове. Той използва комбинация от оптика, източници на светлина и детектори за сканиране на цялата област на слайда и генериране на цифрово представяне на флуоресцентните сигнали.
Предимства от използването на флуоресцентни скенери за слайдове за ISH
- Висока производителност на изображения: В много изследователски и клинични условия е необходимо да се анализират голям брой слайдове. Флуоресцентните скенери за слайдове могат автоматично да сканират множество слайдове, като значително увеличават производителността в сравнение с ръчната микроскопия. Например, в проект за изследване на рака, където стотици тъканни проби трябва да бъдат скринирани за специфични генни пренареждания с помощта на FISH, скенерът за слайдове може да завърши процеса на изобразяване за част от времето, което би отнело на изследовател, използващ традиционен флуоресцентен микроскоп.
- Постоянно качество на изображението: Ръчната микроскопия може да бъде обект на променливост в получаването на изображения поради разликите в техниката на оператора, като например настройките за фокусиране и експозиция. Флуоресцентните скенери за слайдове, от друга страна, са програмирани да използват последователни параметри за изображения за всеки слайд, като гарантират, че получените изображения са с високо и еднакво качество. Това е от решаващо значение за точния количествен анализ на флуоресцентните сигнали в ISH.
- Цифрово архивиране и анализ: След като слайдовете бъдат сканирани, цифровите изображения могат лесно да се съхраняват, споделят и анализират с помощта на специализиран софтуер. Това позволява дългосрочно архивиране на данни и дава възможност за съвместни изследвания, тъй като множество изследователи могат да имат достъп и да анализират едни и същи цифрови изображения от разстояние. Например изследователска група в една част на света може да сподели своите FISH изображения със сътрудник в друга страна за второ мнение или допълнителен анализ.
Нашите флуоресцентни скенери за слайдове и тяхната пригодност за ISH
Нашата компания предлага набор от висококачествени флуоресцентни слайд скенери, включителноДигитален патологичен скенер GScan - 60,Скенер за микроскопски предметни стъкла, иBrightfield Slide Scanner EScan - 1200.
Цифровият скенер за патология GScan - 60 е предназначен за флуоресцентни изображения с висока разделителна способност. Той разполага с чувствителен детектор, който може точно да улавя слаби флуоресцентни сигнали, което често се случва при FISH анализа, където флуоресцентните сонди могат да присъстват в ниски концентрации. Скенерът също има високо прецизен етап, който осигурява точно позициониране на слайда по време на сканиране, минимизирайки риска от артефакти на изображението.
Скенерът за микроскопски предметни стъкла е универсален инструмент, който може да обработва различни видове предметни стъкла и е подходящ както за изследователски, така и за клинични приложения. Той предлага гъвкави опции за изображения, позволяващи на потребителите да коригират параметрите на сканиране според специфичните изисквания на техните ISH експерименти. Например, потребителите могат да избират различни нива на увеличение и времена на експозиция, за да оптимизират откриването на флуоресцентни сигнали.
Скенерът за диапозитиви Brightfield EScan - 1200, въпреки че е предназначен основно за изображения в светло поле, в някои случаи може да се използва и в комбинация с флуоресцентни изображения. Той осигурява висококачествени изображения в светло поле, които могат да се използват за визуализиране на цялостната тъканна морфология, докато флуоресцентното изображение може да се използва за откриване на специфичните нуклеиново киселинни последователности, които представляват интерес.
Съображения за използване на скенери за флуоресцентни слайдове при ISH анализ
Въпреки че флуоресцентните слайд скенери предлагат много предимства за ISH анализ, има и някои съображения, които изследователите трябва да имат предвид.
Подготовка на пробата
Правилната подготовка на пробата е от решаващо значение за успешния ISH анализ с помощта на слайд скенер. Тъканните проби трябва да бъдат фиксирани и обработени правилно, за да се запази целостта на нуклеиновите киселини и да се осигури добра хибридизация на сондата. Прекомерната фиксация или неправилната пермеабилизация може да доведе до намалена достъпност на сондата и по-слаби флуоресцентни сигнали. Освен това слайдовете трябва да са чисти и без остатъци, за да се избегне смущение в процеса на сканиране.
Избор на флуоресцентна сонда
Изборът на флуоресцентни сонди също е важен. Сондите трябва да имат висока специфичност за целевите последователности на нуклеинова киселина и трябва да излъчват силни и стабилни флуоресцентни сигнали. Различните флуорофори имат различни спектри на възбуждане и излъчване и скенерът за слайдове трябва да е съвместим с флуорофорите, използвани в експеримента ISH. Например, ако изследовател използва сонда, маркирана с далечен червен флуорофор, скенерът за слайдове трябва да има източник на светлина и детектор, който може ефективно да възбуди и открие далечната червена флуоресценция.
Анализ на изображението
След като слайдовете бъдат сканирани, цифровите изображения трябва да бъдат анализирани, за да се извлече значима информация. Това често изисква специализиран софтуер за анализ на изображения. Софтуерът трябва да може точно да сегментира флуоресцентните сигнали от фона, да определи количествено интензитета на сигналите и да предостави статистически анализ, ако е необходимо. Някои скенери за слайдове се доставят с вграден софтуер за анализ на изображения, докато други може да изискват използването на софтуер на трета страна.
Заключение
В заключение, флуоресцентните слайд скенери могат да бъдат ефективно използвани за in - situ хибридизационен анализ. Те предлагат изображения с висока производителност, постоянно качество на изображението и възможност за цифрово архивиране и анализ на данни. Нашата гама от флуоресцентни слайд скенери, включителноДигитален патологичен скенер GScan - 60,Скенер за микроскопски предметни стъкла, иBrightfield Slide Scanner EScan - 1200, са много подходящи за ISH приложения.
Ако участвате в анализ на хибридизация in situ и търсите надежден флуоресцентен слайд скенер, препоръчваме ви да се свържете с нас за повече информация и да обсъдим вашите специфични изисквания. Нашият екип от експерти е готов да ви помогне при избора на най-подходящия скенер за вашите изследователски или клинични нужди и да ви предостави подкрепа през целия процес на закупуване.
Референции
- Speel, EJ, Hopman, AH, & Ramaekers, FC (2001). Протоколи за хибридизация in situ. Springer Science & Business Media.
- Левски, JM, & Сингър, RH (2003). Флуоресцентна in situ хибридизация: минало, настояще и бъдеще. Journal of Cell Science, 116 (10), 1995 - 2004.
- Trask, BJ (2002). Човешка цитогенетика: 46 хромозоми, 46 години и все повече. Nature Reviews Genetics, 3 (11), 769 - 778.
